CLONAGEM E SEQUENCIAMENTO DE UMA PROTEÍNA TRAF- LIKE ISOLADA DE BRASSICA OLERACEA SSP. BOTHRYTIS COM ATIVIDADE LECTÍNICA

Resumo

As lectinas são um grupo de proteínas de ligação a carboidrato encontradas em vírus, bactérias, fungos, plantas e animais, as quais estão envolvidas em vários processos biológicos, como defesa do hospedeiro, interação célula-célula, dobramento de glicoproteínas, entre outros. Nosso grupo de pesquisa recentemente identificou uma nova lectina isolada a partir de Brassica oleracea ssp. botrytis (BOL). Para melhor caracterizar esta proteína, as sequências de cDNA e de aminoácidos deduzida foram determinadas. Primers degenerados 5’-garacncgngcntty-3’ foram desenhados a partir da sequência N-terminal, obtida pela degradação de Edman. Em seguida, sementes de couve-flor foram germinadas em meio Murashige e Skoog. O RNA total foi extraído das plântulas e o cDNA foi sintetizado utilizando-se a enzima transcriptase reversa M-MLV e oligodT16N como iniciador. Então os fragmentos de PCR foram sequenciados. O polipeptídeo deduzido com 297 aminoácidos consiste de dois domínios MATH em tandem. A sequência de aminoácidos predita não mostrou nenhuma identidade significativa com outras lectinas conhecidas. Por outro lado, BOL mostrou 100% de identidade com proteínas TRAF preditas de B. rapa e B. napus, sugerindo que BOL pertence à família TRAF-like em plantas. Este é o primeiro relato a descrever a caracterização e clonagem do cDNA de uma lectina de Brassica. O passo seguinte neste estudo envolverá a expressão heteróloga de BOL para posterior caracterização das suas funções biológicas.